752分光光度計工作原理與紅外光譜、拉曼光譜的工作原理近似，采用一定頻率的紫外可見光照射所需檢測的物質，引起物質中電子躍遷，從而表現出隨著吸收波長變化而引起的光譜變化，記錄光譜變化形成分析數據。
752分光光度計可見光因波長不同呈現不同顏色，這些波長在一定范圍內呈現不同顏色的光稱單色光。太陽或鎢絲等發出的白光是復合光，是各種單色光的混合光。利用棱鏡可將白光分成按波長順序排列的各種單色光，即紅、橙、黃、綠、青、藍、紫等，這就是光譜。有色物質溶液可選擇性地吸收一部分可見光的能量而呈現不同顏色，而某些無色物質能特征性地選擇紫外光或紅外光的能量。物質吸收由光源發出的某些波長的光可形成吸收光譜，由于物質的分子結構不同，對光的吸收能力不同，因此每種物質都有特定的吸收光譜，而且在一定條件下其吸收程度與該物質的濃度成正比，分光光度法就是利用物質的這種吸收特征對不同物質進行定性或定量分析的方法。
752分光光度計的使用注意事項：
1)選用儀器的狹縫寬度應小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度值會偏低，狹縫寬度的選擇應以減少狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準，對于大部分被測品種，可以使用2nm縫寬。
2)在開機前將樣品室內的干燥劑取出，儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。
3)吸收池必須潔凈，并注意配對使用。量瓶、移液吸管均應校正、洗凈后使用。比色皿內溶液以皿高不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時應保持比色皿清潔，池壁上液滴應用擦鏡紙擦干，切勿用手捏透光面。測定紫外波長時，需選用石英比色皿。吸收池放入樣品室時應注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈，晾干防塵保存。
4)實驗結束后將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾干。關電源將干燥劑放入樣品室內，蓋上防塵罩，做好使用登記。
5)測試品標注測試物質以及配置濃度。測試中，因采用測試品溶劑為空白對照：由儀器規定波長或者規定的吸收峰自動掃描測定，測吸收度以核對測試品吸收峰位置是否正確。
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